AFB stain

*원리:

 항산성균은 세포벽에 함유되어 있는 다량의 지질 중 mycolic acid라는 특이한 지질은 가지고 있는데, 이 지질이 carbol fuchsin과 결합하여 acid와 alcohol에 탈색되지 않고 염색성을 계속 유지하는 원리를 이용

<Ziehl-Neeson's stain>

*목적:
 항산성균임을 확인하기 위함.

*준비물:
 carbol fuchsin(phenol이 매염제로 들어잇다.), 3% HCl-alcohol, methylene blue, 슬라이드, 루프, 알코올램프, 검체, 화염봉, 염색대

*방법
 균을 슬라이드에 도말 고정하고 염색대 위에 놓는다.

 carbol fuchsin을 슬라이드 위에 붓고  화염봉으로 김이 날 정도만 가온한다.(원리에 의하면 양성균이면 mycolic acid와 carbol fuchsin이 결합 즉 , 균을 염색하는 과정)#가온시 시약이 끓거나 마르지 않도록 한다.(가온을 하는 이유는 지질기를 제거하여 염색이 잘 되게 하기 위함)

 2~3분간 방치(슬라이드를 식히는 중) 후 수세하고 슬라이드를 털어 물기를 제거한다.

 3% HCl-alcohol로 3분간 탈색한다.(양성균은 mycolic acid와 carbol fuchsin이 결합하여 탈색되지 않으나 음성균은 탈색 된다.)

 수세하고 물기를 제거한다.

 methylene blue로 3분간 대조 염색을 한다.(이미 염색된 양성균은 염색되지 않고 탈색된 음성균은 대조 염색된다.

 검경한다.

<형광 염색>
*목적:
 항산성균임을 확인하기 위함

*준비물:
auramin-rhodamine, 3% HCl-alcohol, 0.5% potassium permanganate, 알코올램프, 루프, 검체, 염색대 등

*방법
 검체를 슬라이드에 도말 고정한다.

 슬라이드 위에 auramin-rhodamine를 붓고 약 20분간 염색(균을 염색하는 과정)

 수세 후 물기 제거

 3% HCl-alcohol로 5~10초간 탈색(양성균은 원리에 의해 탈색이 되지 않지만 음성균은 탈색된다.)

 0.5% potassium permanganate로 3분간 처리한다.(과다한 형광물질을 제거하기 위함)

 수세 후 공기 중 건조(여기서 절대 흡습지를 사용하지 말것, 종이에는 다량의 형광물질이 함유되어 있어 위양성이 나올 수 있기 때문)

 형광현미경으로 검경한다.

*결과:
 양성균은 검은 바탕에 녹황색을 띠지만 음성균은 형광현미경으로 보기 때문에 보이지 않는다.